一、干细胞研究的进展与应用前景（论文文献综述）
李梦诗,王越,徐莎,王灵,刘文庸[1]（2021）在《干细胞基础研究和临床研究的现状分析》文中研究说明目的了解近5年干细胞领域基础研究与临床转化现状,为相关领域学科发展提供参考。方法干细胞基础研究部分,于2020年5月15日检索Web of Science核心合集数据库中2015年至2020年干细胞相关文献,选择该领域的高被引论文及热点论文共计1 954篇,通过CiteSpace软件进行关键词分析和聚类分析。干细胞临床研究部分,于2020年5月23日检索美国临床试验数据库（ClinicalTrials.gov）及国家药品监督管理局药品审评中心、中国医药生物技术协会官方网站公布的数据,利用Excel 2007进行汇总整理。结果在基础研究方面,"表达""分化""多能干细胞""T 细胞"和"祖细胞"为干细胞研究的热点,并聚类为"胚胎干细胞""肿瘤干细胞""抗宿主病""细胞来源外泌体""骨组织工程""克隆性造血"和"创伤性脑损伤"7个主题。在临床研究方面,检索到全球有5 506项干细胞相关临床试验,其中我国有482项。全球已批准上市的干细胞产品有18个,以间充质干细胞为主,国内干细胞产品尚处于临床试验阶段。国内已完成备案的73项干细胞临床研究项目中约2/3（49项）为间充质干细胞相关项目,33项（45.2%）涉及脐带来源间充质干细胞,研究疾病类型主要有银屑病、狼疮性肾炎、急性心肌梗死、骨关节炎等。结论对于干细胞研究热点和7个热点主题领域应予以关注。无论是全球已上市的干细胞产品,还是国内开展的干细胞临床研究均以间充质干细胞居多。
赵雅蔚[2]（2021）在《GLI1调控肿瘤干细胞特性在化疗后卵巢癌复发和转移中作用及机制研究》文中提出卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤,严重危害女性健康。目前临床针对卵巢癌的主要治疗手段为手术切除配合以紫杉醇/卡铂为主的一线化疗方案。化疗作为肿瘤的一种重要治疗手段,在治疗初期可使大部分患者达到有效的临床缓解,但卵巢癌的5年生存率仍低于40%,其主要原因是治疗后的高转移和高复发率。因此,探索卵巢癌化疗后复发、转移的机制,阻断卵巢癌复发、转移的信号通路是降低患者死亡率的关键。化疗作为卵巢癌的临床一线治疗手段,在诱导卵巢癌细胞凋亡的同时也具有其双面性,研究显示,紫杉醇、卡铂等经典的化疗药物尽管可以显着抑制原位肿瘤生长,但同时也可导致肿瘤肺转移增加并引起肿瘤的二次增殖。而这种化疗诱导的残余肿瘤细胞增殖与迁移能力增加的现象,可能是导致卵巢癌化疗后高转移、高复发的诱因。同时研究发现,放、化疗作为一种应激因素,可以诱导肿瘤细胞获得干细胞样特性,转化为肿瘤干细胞（CSC）样细胞。CSC作为肿瘤组织中少量、特殊的细胞群体,具有很强的自我更新和多向分化潜能,使其具有强致瘤性、多重耐药性和高转移性的特点,在肿瘤的复发和转移中发挥重要作用。而这种化疗诱导的CSC特性增加是否参与了卵巢癌化疗后的复发与转移过程,目前尚不清楚。在胚胎或成体干细胞中,Nanog、SOX-2、BMI1、Oct-4等干细胞相关基因已被证实可直接诱导细胞的干性,而这些基因进一步受Hedgehog（Hh）、Wnt、Notch等信号通路的调控。在机体正常条件下,这些信号通路处于严格调控之下,但当肿瘤发生时,相关信号通路及基因则会发生突变或异常激活,从而介导CSC的功能发挥与CSC特性的维持。而在卵巢癌中,何种干细胞相关基因诱导了化疗后卵巢癌CSC特性的获得,以及调控该基因的上游关键转录因子,仍有待进一步探究。基于以上背景,本研究在第一部分中,对（1）化疗对卵巢癌细胞再增殖、迁移能力以及CSC特性的作用;（2）介导化疗后卵巢癌CSC特性增加的干细胞相关基因进行了探讨:首先,利用多种卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780或KURAMOCHI及两种卵巢癌临床化疗药物卡铂及VP-16,通过Transwell小室建立化疗后逐渐死亡的卵巢癌细胞（Feeder细胞）与少量未经处理的卵巢癌细胞（Receptor细胞）的共培养细胞模型,模拟化疗后大量肿瘤细胞的死亡过程对少量残余肿瘤细胞的作用。在该体外模型中,通过检测Receptor细胞的迁移、划痕愈合和克隆形成能力证实了化疗对卵巢癌细胞迁移与再增殖的促进作用。同时检测EMT的相关标记物VIM、TWIST、Snail的RNA表达,证实VIM和Snail基因可能在化疗诱导卵巢癌细胞迁移中发挥重要作用。进一步通过对Receptor细胞的干细胞成球能力及CSC表面标记物CD44、CD133表达检测,证实化疗可诱导卵巢癌CSC特性显着增加;最后检测卵巢癌干细胞相关基因Nanog、SOX-2、BMI1、Oct-4的表达情况,结果显示干细胞相关基因SOX-2和BMI1可能在化疗诱导卵巢癌CSC特性增加过程中发挥关键作用。进一步在本研究的第二部分中,我们利用生物信息学方法挖掘化疗后调控卵巢癌干细胞相关基因的关键转录因子——GLI1:通过生物信息学方法结合文献检索,从卵巢癌化疗前后的临床基因芯片数据集中,筛选调控干细胞相关基因的关键转录因子,得到6个候选转录因子,进一步在本研究构建的共培养体系中对其进行m RNA表达水平验证,结果显示GLI1为化疗后差异倍数最大的转录因子。对GLI1进行生存分析,发现GLI1高表达患者5年总生存率显着降低。同时在临床患者组织病理切片证实化疗患者较未化疗患者GLI1表达显着上调,结合临床基因芯片的GO与KEGG富集分析,最终确定干细胞调控相关转录因子GLI1为调控化疗后卵巢癌CSC特性增加的关键调控转录因子。在此基础上,利用GLI1 siRNA或小分子抑制剂,研究GLI1在化疗后卵巢癌细胞的再增殖、迁移和CSC特性增加中的作用:结果显示抑制GLI1可显着抑制化疗后共培养体系Receptor细胞的迁移与再增殖,以及EMT相关基因VIM和Snail的上调。进一步通过对Receptor细胞的干细胞成球能力及CSC表面标记物CD44、CD133表达进行检测,证实抑制GLI1可显着抑制化疗诱导的卵巢癌细胞干细胞特性增加;最后检测化疗诱导上调的干细胞调控相关基因SOX-2、BMI1表达,证实敲除GLI1可显着抑制BMI1的上调,但不影响SOX-2的上调,由此提示GLI1通过其下游干细胞相关基因BMI1调控化疗后卵巢癌细胞CSC特性增加以及再增殖与迁移。研究显示,肿瘤源性可溶性因子可诱导骨髓间质细胞干性增加,因此在本研究构建的Transwell上下两层细胞的非接触共培养体系中,化疗药物处理后逐渐死亡的Feeder细胞对残余肿瘤细胞（Receptor细胞）CSC特性的促进作用可能源于肿瘤微环境中可溶性的因子的改变。多种化疗药物可诱导肿瘤微环境多种相关因子改变,我们前期和其他研究发现,化疗在大量杀伤肿瘤细胞的同时可通过激活Caspase-3/iPLA2/AA/COX-2花生四烯酸（AA）代谢通路导致肿瘤微环境前列腺素E2（PGE2）水平增加;而PGE2对肿瘤的增殖、迁移均有促进作用。基于此,本研究探讨了化疗后的PGE2分泌增加对GLI1/BMI1信号通路的调控作用,以及其对肿瘤的CSC特性、迁移和再增殖的作用:结果显示,化疗后Feeder细胞AA代谢通路激活,伴随肿瘤微环境PGE2分泌水平显着升高。进一步利用外源性PGE2,证实外源性PGE2可显着促进卵巢癌细胞再增殖、迁移以及CSC特性增加,此外,其对GLI1/BMI1信号通路具有上调作用。基于以上结果,在本研究的第三部分中,本文进一步提出黄连素靶向AA代谢通路进而重塑化疗后肿瘤微环境,抑制CSC特性逆转化疗后复发转移的卵巢癌临床潜在治疗策略:首先在共培养体系中加入黄连素,证实低剂量黄连素对卵巢癌细胞本身无显着杀伤作用,而其与化疗药物联用则显着抑制化疗后共培养体系Receptor细胞的迁移与再增殖,以及EMT相关基因VIM和Snail的上调。进一步通过对Receptor细胞的干细胞成球能力及表面标记物表达检测,证实黄连素对化疗后肿瘤微环境诱导改变的卵巢癌CSC特性增加具有抑制作用,并可抑制化疗后卵巢癌干细胞相关基因BMI1表达的上调。进一步对其作用机制进行探讨,发现黄连素可通过抑制Caspase 3/iPLA2/AA/COX-2/PGE2信号通路抑制化疗后肿瘤微环境PGE2水平的增加,重塑化疗后肿瘤微环境。最后通过对Receptor细胞的GLI1及BMI1蛋白表达检测,明确黄连素对化疗后肿瘤微环境改变诱导GLI1/BMI1信号通路异常激活具有显着抑制作用。综上所述,本文得出如下结论:（1）化疗后Caspase 3/iPLA2/AA/COX-2/PGE2信号通路的异常激活介导肿瘤微环境PGE2水平增加,进而通过GLI1/BMI1信号通路诱导卵巢癌细胞的CSC特性增加以及卵巢癌细胞的再增殖与迁移。（2）黄连素可通过抑制化疗后异常激活的AA代谢通路关键酶iPLA2与COX-2抑制肿瘤微环境PGE2产生,重塑化疗后肿瘤微环境,进而干预化疗后肿瘤微环境诱导的CSC特性增加以及再增殖与迁移。由此,本文提出:“通过（1）重塑化疗后肿瘤微环境可溶性因子改变以及（2）靶向化疗后残余肿瘤细胞GLI1异常激活,从而抑制化疗诱导的CSC特性增加”的肿瘤化疗后复发转移潜在干预策略,可能为开发卵巢癌的化疗后复发与转移的临床防治新策略,从而提高卵巢癌化疗效率、延长化疗有效时间窗、提高患者生存质量提供理论及实验基础。
杨君君[3]（2021）在《天然食材来源的抗氧化剂参与调控骨性关节炎氧化应激的相关研究》文中研究说明研究背景骨性关节炎（osteoarthritis,OA）与基因、代谢紊乱、饮食作息、肥胖、长期体力劳动及既往关节损伤等多因素相关,发病机理不明从而使其治疗受限。间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）可选用关节腔输注手段,进入OA关节腔内,发挥其多向分化优势及旁分泌功能,但易受到局部组织微环境的干扰导致其治疗作用下降。越来越多的基础研究表明:氧化应激参与了OA发病的病理生理过程;长期摄入抗氧化剂丰富的食材（大蒜、西兰花及番茄等）有利于延缓OA的进程;MSCs关节腔注射治疗OA效果不佳可能与关节腔内过多的活性氧导致MSCs存活受限有密切联系。因此,本研究选取了来源于这些天然食材的具有抗氧化功能的生物活性物质（大蒜素、萝卜硫素及番茄红素）,并选用目前研究较为广泛的抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（N-Acetyl-L-cysteine,NAC）作为经典对照,来探索这一系列抗氧化剂对OA的调控治疗效果、对MSCs关节腔注射治疗OA的影响及其可能相关的机制。研究目的本研究通过选取大鼠脂肪干细胞系、提取人或大鼠OA软骨细胞及建立大鼠OA模型,探讨大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人或大鼠OA软骨细胞表型影响、大鼠OA的治疗效果、大鼠脂肪干细胞表型变化及MSCs关节腔注射疗法治疗大鼠OA的疗效的作用与分子机制。研究方法第一部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA骨软骨组织及软骨细胞表型影响1.人OA软骨细胞的分离提取与培养提取、培养并扩增人OA软骨细胞,选用P1代人OA软骨细胞作为实验细胞,显微镜下进行拍照观察,HE、阿尔新蓝、Safranine O及COL 2荧光染色鉴定;2.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA软骨细胞活性的影响采用CCK-8法检测不同梯度浓度大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸对人OA软骨细胞活性的影响,并初步确定后续实验所用的药物浓度。根据CCK-8法初步筛选浓度后,于光学显微镜下检测细胞状态有无改变,并再次用Calcein-AM/PI双染检测药物处理人OA软骨细胞后细胞的存活状态;3.采用H2O2诱导体外实验中的氧化应激状态选取200μM H2O2（用培养基进行梯度稀释）对骨软骨组织和软骨细胞进行诱导,诱导8 h,即完成体外氧化应激状态的诱导;4.人骨软骨组织的获取及其处理用电钻将人骨软骨组织从全膝关节置换术的关节样本中分离并加入含有H2O2的培养基中完成氧化应激诱导,吸除原培养基后再加入含抗氧化剂的培养基中进行处理。处理完成后,固定脱钙包埋,石蜡切片,采用HE、番红O及甲苯胺蓝染色检测骨软骨组织的形态及其细胞外基质的表达;5.人OA软骨细胞的处理在人OA软骨细胞中加入含有H2O2的培养基完成氧化应激的诱导,吸除诱导培养基后再加入含抗氧化剂的培养基中处理。完成处理后,准备进行以下检测:CCK-8、光学显微镜、HE染色及流式细胞仪:检测细胞形态及凋亡比例;阿尔新蓝及Safranine O染色:检测ACAN表达;免疫荧光、Western-Blot及qPCR:COL X、iNOS、COL 2、ACAN、SOX-9、COL1、i NOS、IL-6、TNF-α、MMP-13及Nrf2的表达;ELISA检测上清IL-6、TNF-α及MMP-13含量;qPCR检测细胞中GPX1、NOX-4、GPX3、GPX4、IL-1β、SOD1、CAT、GST、ADAMTS-5及COX-2的表达;6.抗氧化剂调控人OA软骨细胞的通路研究采用全反式维甲酸抑制细胞中Nrf2的表达,在抗氧化剂添加或不添加Nrf2抑制剂的情况下按照上述方法同样处理人OA软骨细胞。Western-Blot检测细胞Keap1、p-Nrf2、Nrf2、COL 2、SOX-9、i NOS及IL-6的含量;第二部分:膝关节腔注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠OA的治疗效果1.大鼠软骨细胞的分离提取与培养提取分离大鼠软骨细胞并选用P1代大鼠软骨细胞作为本部分实验所需细胞,显微镜下进行拍照观察;2.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠软骨细胞的活性影响CCK-8法检测在第一部分使用的抗氧化剂的浓度对大鼠软骨细胞有无生物学毒性及副作用,估算后续关节腔注射实验所用的药物浓度;3.大鼠膝OA造模及大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸的膝关节腔注射采用前交叉韧带切除术（ACLT）对大鼠膝关节进行OA造模（手术4周后完成造模）。造模完成后,于大鼠关节腔内注射抗氧化剂（1次/周;5周）;4.大鼠膝关节组织学切片染色完成注射后,获取大鼠膝关节样本,固定脱钙包埋,石蜡切片。HE染色检测软骨形态及其周围基质情况;Safranine O-Fast green与COL 2染色检测关节软骨中蛋白多糖及COL 2;第三部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞表型的影响1.大鼠脂肪干细胞的培养购买大鼠脂肪干细胞系,体外培养并扩增,选用P7代脂肪干细胞作为实验细胞;2.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞活性的影响采用CCK-8法检测不同梯度浓度大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸对大鼠脂肪干细胞活性的影响,并初步估计后续实验所用的药物浓度;3.采用H2O2诱导体外实验中的氧化应激状态选取200μM H2O2进行诱导8 h,即完成氧化应激状态的诱导;4.大鼠脂肪干细胞的处理在大鼠脂肪干细胞中加入含有H2O2的培养基完成氧化应激的诱导,吸除诱导培养基后再加入含抗氧化剂的培养基处理。完成处理后,检测细胞中i NOS、p53、C-caspase3、SOX-9、COL 2、ACAN、RUNX2、IL-6、TNF-α及MMP-13蛋白的表达;上清中IL-6、TNF-α及MMP-13的含量;大鼠脂肪干细胞增殖、迁移与分化能力的变化;大鼠脂肪干细胞活性氧的含量变化;第四部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞在关节腔内生存情况及其对大鼠OA的治疗效果的研究1.大鼠ADSCs的标记采用近红外光染料Di R对大鼠脂肪干细胞进行标记;2.大鼠OA造模及抗氧化剂与抗氧化剂+ADSCs膝关节腔注射采用ACLT对大鼠膝关节进行OA造模（手术4周后完成造模）。造模完成后,于大鼠关节腔内注射抗氧化剂+Di R标记的大鼠脂肪干细胞。对于ADSCs存活实验,完成第一次注射后,注射后第3天用活体成像仪器检测大鼠脂肪干细胞在关节腔内存活情况;对于治疗效果实验,1次/周,持续5周,完成注射治疗后进行取材;3.大鼠膝关节组织学切片染色完成注射后,获取大鼠膝关节样本,固定脱钙包埋,石蜡切片。HE染色检测软骨形态及其周围基质情况;Safranine O-Fast green与COL 2染色检测关节软骨中蛋白多糖及COL 2;研究结果第一部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA骨软骨组织及软骨细胞表型影响1.提取人OA软骨细胞生长状态良好,呈典型的铺路石样。阿尔新蓝、番红O染色及COL 2免疫荧光染色提示提取的细胞表达较多的蛋白多糖与COL 2;2.CCK-8结果提示:大蒜素在31μM、萝卜硫素在7μM、番茄红素在1.2μM及N-乙酰-L-半胱氨酸在31μM对人OA软骨细胞活性无明显影响。光学显微镜下形态及Calcein-AM/PI染色进一步证实,抗氧化剂对人OA软骨细胞活性无明显影响;3.HE、番红O及阿尔新蓝染色结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人骨软骨组织的表面不规则,蛋白多糖降解较多;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,骨软骨组织的形态相对完整,蛋白多糖表达稍多;4.相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞核浓缩,细胞间连接与细胞外基质含量明显减少;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞核形态稍恢复,细胞间连接和细胞外基质表达相对增多。流式细胞检测计数提示:相比正常组（0.76±0.09%）,H2O2处理后,人OA软骨细胞凋亡比例明显升高（12.48±0.55%）;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的凋亡比例降低（大蒜素:0.94±0.22%）（萝卜硫素:1.46±0.15%）（番茄红素:1.21±0.16%）（N-乙酰-L-半胱氨酸:1.04±0.14%）。CCK-8提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞活性明显下降;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞活性稍增加。5.免疫荧光染色及Western-Blot结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的i NOS表达含量明显升高;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的i NOS表达含量减少;6.qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的抗氧化酶（GPX1、GPX3、GPX4、SOD1、CAT及GST）与Nrf2的表达含量明显下降,NOX-4的表达明显上升;相比H2O2组,人OA软骨细胞的绝大多数抗氧化酶与Nrf2的表达含量明显上升,NOX-4的表达明显下降;（相比H2O2组,GPX1在大蒜素组、GPX1与GST在萝卜硫素组、GPX3在番茄红素组及GPX1与SOD1在N-乙酰-L-半胱氨酸无明显变化）7.阿尔新蓝、番红O与软骨标志物免疫荧光染色、Western-Blot及qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的COL 2、SOX-9及ACAN表达含量明显下降;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的COL 2、SOX-9及ACAN表达含量明显上升;8.免疫荧光染色、ELISA、Western-Blot及qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显上升;相比H2O2组,加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显下降;9.qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞IL-1β、ADAMTS-5与COX-2表达含量明显上升;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的IL-1β、ADAMTS-5与COX-2表达含量明显下降;10.免疫荧光染色、Western-Blot及qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞COL X表达含量明显上升,COL 1表达无明显变化;相比H2O2组,加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞COL X表达含量明显下降,COL 1表达无明显变化;11.荧光染色及Western-Blot提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的Keap1、Nrf2及p-Nrf2的表达含量无明显变化;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的Keap1表达含量明显下降,Nrf2及p-Nrf2表达含量明显上升;12.通路实验中,Western-Blot结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞Keap1与Nrf2表达无明显变化,SOX-9与COL2表达下降,IL-6与i NOS表达上升;相比H2O2组,加入抗氧化剂及Nrf2抑制剂后,人OA软骨细胞Keap1表达稍下降,Nrf2及p-Nrf2表达含量下降,SOX-9、COL2、IL-6与i NOS表达无明显变化;第二部分:膝关节腔注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠OA的缓解效果1.提取的大鼠软骨细胞生长状态良好,呈典型的多边型铺样,形态均一;2.CCK-8结果提示:大蒜素在31μM、萝卜硫素在7μM、番茄红素在1.2μM及N-乙酰-L-半胱氨酸在31μM对大鼠OA软骨细胞活性无明显影响;3.HE、Safranine O-Fast green及COL 2免疫组化染色结果提示:相比正常大鼠,ACLT造模的OA大鼠软骨表面不光滑,蛋白多糖与COL 2表达较少;相比OA大鼠,关节腔内抗氧化剂注射后的软骨表面稍平整,蛋白多糖与COL 2相对增多;第三部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞表型的影响1.购买的大鼠脂肪干细胞系生长状态良好,呈典型的漩涡样生长,呈长梭状;2.CCK-8结果提示:大蒜素在31μM、萝卜硫素在7μM、番茄红素在1.2μM及N-乙酰-L-半胱氨酸在31μM对大鼠脂肪干细胞活性无明显影响;3.免疫荧光染色及Western-Blot结果提示:相比正常组,H2O2处理后,大鼠脂肪干细胞的i NOS、p53、C-caspase3、IL-6、TNF-α、MMP-13、RUNX2表达含量上升,ACAN、SOX-9与COL 2表达下降;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,大鼠脂肪干细胞的i NOS、p53、C-caspase3、IL-6、TNF-α、MMP-13、RUNX2表达含量下降,ACAN、SOX-9与COL 2表达上升;4.ELISA结果提示:相比正常组,H2O2处理后,大鼠脂肪干细胞的IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显上升;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,大鼠脂肪干细胞的IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显下降;5.H2O2组大鼠脂肪干细胞的成骨与成软骨分化能力减弱,成脂分化能力增强,大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸组中的“矿化的钙结节”与蛋白多糖增多,而脂肪空泡减少;H2O2组大鼠脂肪干细胞的增殖与迁移能力减弱,大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸组中迁移与增殖的细胞数量较多;第四部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞在关节腔内生存及其作为干细胞的混悬液对大鼠OA的治疗效果的研究1.Di R标记后的大鼠脂肪干细胞生长状态活跃,显微镜下细胞膜标记良好;2.活体成像结果提示:相比未协同注射抗氧化剂OA大鼠,在协同注射抗氧化剂后,Di R标记后的大鼠脂肪干细胞在OA大鼠关节腔内存活数量明显增多;3.大鼠膝关节石蜡切片HE、番红-固绿及COL 2免疫组化染色结果提示:相比正常大鼠,OA大鼠与未协同注射抗氧化剂OA大鼠软骨表面不光滑,蛋白多糖与COL 2表达较少;相比未协同注射抗氧化剂OA大鼠,在协同注射抗氧化剂后,大鼠软骨表面稍平整,蛋白多糖与COL 2表达相对增多;研究结论1.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素通过激活Keap1/Nrf2通路降低H2O2诱导后的人OA软骨细胞的氧化应激水平、提高抗氧化酶的表达、抑制炎症因子的表达、改善软骨相关表型及缓解软骨细胞肥大化的影响;2.关节腔内注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素可有效缓解大鼠OA的进展;3.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素降低H2O2诱导后的大鼠脂肪干细胞的氧化应激水平、抑制炎症因子的表达、改善成软骨分化及缓解干细胞凋亡衰老与肥大化的影响;4.关节腔内注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素可保护大鼠脂肪干细胞在OA大鼠关节腔内的存活,并可能有助于干细胞的注射治疗OA的效果;
张轩[4]（2021）在《产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用》文中提出枯草芽孢杆菌广泛存在于传统发酵食品内,可产生多种对人体有益的生物活性物质。枯草芽孢杆菌发酵的纳豆因其富含具有抗血栓功能的纳豆激酶（Nattokinase）,作为一种风味食品受到部分消费者的青睐。枯草芽孢杆菌液体发酵生产的纳豆激酶也已被用于抗血栓功能食品或药品的制备。另外,也有报道,口服枯草芽孢杆菌可调节机体肠道菌群和免疫功能,发挥抗炎、抗肿瘤以及延缓衰老等作用。目前,纳豆激酶口服产品的剂型单一,且耐胃酸和肠道缓释能力较差;枯草芽孢杆菌益生菌制剂主要为冻干菌粉,食用人群局限。上述产品的局限性,限制了其应用范围。本研究针对上述产品的不足,利用筛选的同时产生纳豆激酶和凝乳酶的枯草芽孢杆菌菌株,研制了一种新型的枯草芽孢杆菌功能发酵乳和一种纳豆激酶口服缓释制剂,对其制备工艺和相关功能进行了系统研究。主要研究内容和结果如下:首先,用从自然界采集的稻草作为发酵菌种的来源制作纳豆,从自制纳豆浸出液中分离、筛选出产双酶（纤维蛋白溶解酶和凝乳酶）的菌株。通过对菌株形态观察和生化特性检测,结合16S rDNA基因序列测定结果,确定此菌株为枯草芽孢杆菌,命名为B.subtilis JNFE0126。在优化后的培养条件下,该菌株产纳豆激酶活性最高达14512.4IU/mL,产凝乳酶活性最高达875.5 SU/mL,可以满足中性条件下制备凝固型发酵乳的要求。酶抑制剂试验结果表明,发酵液纤溶活性来源于丝氨酸蛋白酶,凝乳活性来源于金属蛋白酶。提取该菌株的DNA,根据基因库中已经报道的纳豆激酶和凝乳酶（金属蛋白酶M4）的基因序列设计引物进行PCR基因调取扩增后测序,结果表明该菌株具有上述两种酶的基因,其序列分别与已经报道的纳豆激酶和金属蛋白酶M4具有高度相似性（同源性分别为99.1%和97.6%）。其次,分别收集B.subtilis JNFE0126纳豆激酶和凝乳酶最高产酶期的发酵液,采用硫酸铵沉淀、离子交换色谱及凝胶过滤色谱分别对纳豆激酶和凝乳酶进行分离纯化,然后用SDS-PAGE检验样品纯度及测定其相对分子质量。结果表明,纯化的纳豆激酶和凝乳酶的相对分子质量分别为27 KD和42 KD左右。纳豆激酶最适温度为40℃,最适pH为7.0,pH 6.0-9.0条件下具有较高的酶活和较好的稳定性。凝乳酶的最适作用温度为55℃,最适pH值为6.5,在pH 6.0-8.0条件下具有较高的酶活,在pH 5-10条件下有较好的的稳定性。在此基础上,研究并优化了B.subtilis JNFE0126发酵鲜牛乳制作凝固型发酵乳的配方和发酵条件,评价了所得产品的品质特性和抗血栓功能。优化的配方和发酵条件为:鲜牛乳,大豆蛋白2%,蔗糖4%,羟丙基二淀粉磷酸酯1.5%,果胶0.1%,藻酸丙二醇酯（PGA）0.1%,发酵温度41℃,发酵时间8 h。得到发酵乳为软嫩的乳白色凝乳块,奶香浓郁,口感爽滑,无明显不良风味。扫描电镜观察表明,凝乳块内部呈现海绵状微观结构,酪蛋白胶束及亚胶束相互交联形成整体的三维结构,胶束间仍然存在大量微细孔隙,这些孔隙起着保持水分的作用。发酵乳的纤溶活性达215.1 U/mL,4℃储藏14天酶活性可保留66%,储藏60天活性仍保留43%;小鼠黑尾试验表明,口服该发酵乳具有显着的体内抗血栓效果。应用Dextran sulfate sodium salt（DSS）诱导性炎症性肠病动物模型评价了上述发酵乳对肠道菌群的调节作用和对炎症性肠病的防治效果,并探讨了其作用机制和实际应用前景。动物疾病症状观察和肠道组织病理分析结果表明,口服B.subtilis JNFE0126发酵乳可明显减轻DSS诱导性炎症性肠病动物的疾病严重程度,减轻动物的肠道粘膜的出血、炎症和溃疡等病理损伤;动物肠道菌群的检测分析和和肠粘膜内炎症相关因子和上皮再生相关蛋白表达水平的测定结果表明,口服B.subtilis JNFE0126菌株发酵乳可调节动物的肠道菌群,增加菌群的多样性,抑制有害菌生长;该发酵乳可抑制肠道粘膜内炎症因子表达水平,提高炎症抑制因子表达水平,因而减轻肠粘膜的炎症性损伤。与此同时,B.subtilis JNFE0126发酵乳可促进肠粘膜上皮干细胞的增殖分化,促进粘膜细胞的粘液蛋白和上皮连接蛋白的表达,加速肠粘膜屏障和上皮屏障的修复,从而抵御有害菌和炎症因子的侵入。最后,研制了一种具有双层壳-核结构（壳聚糖核-纳豆激酶-酪蛋白）的纳豆激酶口服缓释颗粒,并通过动物试验评价其在体内抗血栓作用。采用壳聚糖为核心,京尼平为壳聚糖核-纳豆激酶交联剂,牛乳酪蛋白为颗粒外层保护材料,TG酶为保护层的交联剂,按照分步交联的程序制备纳豆激酶缓释颗粒。用扫描电子显微镜对获得的缓释颗粒进行形态学分析,并使用纳米金交联的IgG作为模型药物验证了酪蛋白保护层的包埋效果,确定其形成了双层壳-核结构。通过体外模拟胃、肠液消化试验测定了该缓释颗粒的释放动力学特征,结果表明该颗粒在胃酸中能有效保护纳豆激酶活性,并在肠液中缓释达12小时。最终对该缓释颗粒进行动物口服试验,动态观察颗粒内纳豆激酶的体内缓释过程及其抗血栓效果。结果表明,上述纳豆激酶口服缓释颗粒具有很强的抗胃酸能力,并在肠道内可缓慢释放出纳豆激酶及其不同大小相对分子质量的具有纤维蛋白溶解活性的降解产物,缓释过程超过12小时。小鼠黑尾模型动物口服该颗粒,可明显抑制小鼠尾部血管内的血栓形成并促进血栓溶解,效果显着优于口服游离纳豆激酶。综上所述,本研究利用筛选的B.subtilis JNFE0126制备的发酵乳具有抗血栓和调节肠道功能的作用,有良好的应用前景。本研究开发的纳豆激酶口服缓释颗粒具有耐胃酸能力和肠道缓释功能,可提高纳豆激酶的口服利用度,有望作为功能食品添加剂用于研制抗血栓功能食品。
汪姣[5]（2021）在《胎盘间充质干细胞对糖尿病肾脏疾病免疫炎症损伤的修复作用及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景与目的:糖尿病肾脏疾病（DKD）是由糖尿病引起的以肾小球硬化和蛋白尿为主要特征的代谢性疾病,是糖尿病最严重的微血管并发症之一,目前已成为导致终末期肾病的主要原因之一。现有治疗方法包括严格控制血糖和血压、限制蛋白质摄入、减少尿蛋白排泄、使用RAS系统阻断剂和SGLT-2抑制剂等,疗效仍有限,很难阻止DKD的发生与进展。鉴于免疫炎症反应是DKD持续发展的驱动因素,本研究立足于免疫炎症视角探寻DKD的防治新策略,具有较为重要的研究意义。近年来,以干细胞治疗为基础的再生医学在防治DKD中具有良好的应用前景,尤其是间充质干细胞（MSCs）因其免疫原性低、强大的免疫调节性能、来源丰富以及不受伦理束缚等优点而备受青睐。已有研究证据显示,MSCs可通过减轻氧化应激、旁分泌营养因子、调节系统或肾脏局部免疫微环境等促进DKD损伤的修复。然而,大多数研究集中在MSCs与固有免疫细胞的交互作用上,其能否通过调节适应性免疫细胞如Th17/Treg细胞平衡对DKD发挥治疗作用,目前尚缺少相关文献报道。基于以上研究背景,本项目拟研究P-MSCs对DKD免疫炎症损伤的修复作用及可能的分子机制。研究方法:本研究首先从GEO数据库筛选出DKD患者肾组织表达芯片数据集,并应用CIBERSORT及单样本基因集富集得分（ss GSEA）算法进行免疫浸润分析。应用主成分分析（PCA）确定免疫浸润特征对DKD患者与正常对照组的聚类能力,并采用R“psych”软件包分析各类免疫细胞在DKD微环境中的相互关系。随后,选取本院DKD及对照肾脏蜡块标本进行病理染色及多标记全景分析DKD微环境差异表达的免疫细胞浸润模式及程序性死亡受体-1（PD1）表达水平。接着,分离并鉴定P-MSCs,构建链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病（T1DM）肾损伤模型并随机分为2组:DKD模型组、P-MSCs治疗组,以正常大鼠作为对照组。STZ注射后8周,尾静脉注射P-MSCs细胞悬液（1×106/细胞,每周1次,共3次）或等量的生理盐水。P-MSCs首次输注后8周,收集每只大鼠尿液、血清及肾脏等组织样本进行后续分析。应用全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮、血糖水平,ELISA法检测血清胱抑素C水平和尿液微量白蛋白水平,苦味酸法检测尿液肌酐水平。应用透射电镜、HE染色及PAS染色评估各组肾脏组织病理改变。应用免疫荧光法进行P-MSCs示踪检测,流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞比例,液相芯片技术检测血清及肾脏组织细胞因子（IL-17A、IL-6、IL-10）水平。另外,利用DKD模型组与P-MSCs治疗组肾脏组织m RNA转录组测序分析显着富集的通路。最后,分离大鼠脾脏淋巴细胞并构建与P-MSCs共培养体系,分为4组:空白对照组、IL-2（10 ng/m L）+PHA（10ug/m L）刺激淋巴细胞组、淋巴细胞与P-MSCs直接接触（按4:1比例加入）组、淋巴细胞与P-MSCs间接接触（上室为淋巴细胞,下室为P-MSCs）组。应用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例和PD1在淋巴细胞中的表达水平,从而分析P-MSCs调节Th17/Treg细胞平衡的可能途径。而且,应用PD-L1 si RNA序列下调P-MSCs上PD-L1表达,通过q RT-PCR验证干扰效率,并应用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例,从而验证P-MSCs是否通过PD1/PD-L1通路调控Th17/Treg细胞平衡。研究结果:本研究从GEO数据库中筛选出25例对照与19例DKD样本进行免疫浸润分析,研究结果显示在DKD组织中细胞毒性T细胞、Th2、Tfh、黏膜相关T细胞、单核细胞、巨噬细胞浸润水平显着升高;Treg细胞、NK细胞、中性粒细胞浸润水平显着降低;Th1和Th17细胞在DKD组织中浸润水平呈升高趋势。此外,PCA与相关性分析结果提示免疫细胞浸润特征能将DKD与对照样本很好地区分开,且各类免疫细胞在DKD肾脏微环境中呈网络式调控关系。在本院收集的6例DKD与6例对照样本验证结果显示,巨噬细胞和Treg细胞浸润水平与预测结果一致,但几乎未观察到Th2细胞的浸润;而且PD-1在DKD肾脏微环境中表达显着升高。分离的P-MSCs在细胞形态上呈纺锤状成纤维样,其细胞表面高表达CD73、CD90、CD105、低表达CD19、CD31、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR,而且P-MSCs细胞能向脂肪、软骨、骨组织分化,因而符合MSCs的鉴定标准。P-MSCs体内示踪结果表明,其主要归巢于胸腺及脾脏等免疫器官,而在胰腺及肾脏局部组织中定植数量很少。P-MSCs治疗能有效改善DKD模型大鼠血糖、肌酐、尿素氮、尿白蛋白/肌酐比值、肾脏肥大指数以及肾脏病理损伤;P-MSCs治疗明显降低Th17细胞比例和升高Treg细胞比例,同时降低促炎因子IL-17A、IL-6水平以及升高抗炎因子IL-10水平。而且,肾脏转录组学分析结果显示,适应性免疫通路、细胞因子通路（IL-17信号通路与TNF-α信号通路）在P-MSCs治疗组显着富集,从而佐证了MSCs通过调节免疫炎症保护DKD的作用机制。P-MSCs与T淋巴细胞共培养结果显示,PHA刺激组Th17细胞比例显着升高、Treg细胞比例显着降低;与PHA刺激组相比,P-MSCs直接接触组Th17细胞比例显着降低、Treg细胞比例显着升高,同时诱导T淋巴细胞PD1表达的上调;而P-MSCs间接接触组Th17及Treg细胞比例未见显着变化;以上结果提示P-MSCs以直接接触方式能显着改善Th17/Treg细胞平衡。而且,与si RNA对照组相比,si RNA PD-L1转染P-MSCs组Th17细胞比例显着升高、Treg细胞比例显着降低,从而提示P-MSCs可能部分通过PD1/PD-L1通路调控Th17/Treg细胞平衡。研究结论:本研究结果表明,P-MSCs通过调节免疫炎症促进DKD损伤的修复,而且PD-1/PD-L1通路可能是介导P-MSCs调控Th17/Treg平衡的分子机制,从而为MSCs应用于DKD防治提供新的实验数据。
虞成功[6]（2021）在《刺激响应性金纳米粒子对肺纤维化治疗过程中移植干细胞的CT成像示踪研究》文中提出特发性肺纤维化（IPF）是一种严重的肺部损伤性疾病,死亡率高、生存期短,目前尚无有效的治疗手段。近些年来,干细胞在IPF的治疗中取得重要的进展,但是临床转化依然存在挑战。原因之一是当前缺乏有效的手段对移植干细胞进行实时、精准示踪,难以监控干细胞在体内发挥治疗作用的过程,进而导致无法进行治疗效果评估和相应的医疗干预。在IPF的干细胞治疗中,金纳米粒子（AuNPs）作为示踪剂用于干细胞的CT成像示踪有较高的实际应用价值和临床转化前景。其中,示踪剂的结构和性质与细胞的相互作用密切相关,进一步影响着CT成像示踪的效果,因此开发出合适的示踪剂是实现干细胞CT成像示踪的关键。本论文以肺纤维化治疗过程中对移植干细胞高灵敏度、长期CT成像示踪为目标,通过功能化修饰调控金纳米粒子表面性质来影响与细胞的相互作用,实现体内CT信号增强和长时程的移植干细胞示踪效果。主要工作分为以下两个部分:本论文第一部分利用温度敏感性聚合物聚N-异丙基丙烯酰胺聚丙烯酰胺嵌段共聚物（pNIPAAm-b-pAAm）对金纳米粒子进行修饰,得到胶体稳定性好并且具有温度敏感特性的金纳米粒子TRAuNPs。利用不同温度下纳米粒子的表面性质实现增强干细胞标记效率和延长标记时间的效果。实验结果显示,在与间充质干细胞（MSCs）孵育过程中,通过热刺激（39℃）调控TRAuNPs的疏水性和尺寸,可以增强示踪剂对细胞的标记效率;而标记之后的生理温度使得TRAuNPs发生亲水性相变,能够延长示踪剂对MSCs的标记时间。此外,示踪剂及其标记过程对MSCs显示出良好的安全性,标记后不影响干细胞的活性、增殖、凋亡、细胞周期和分化等生理功能。体内实验中,将标记的MSCs移植到IPF模型小鼠体内,采用CT成像技术能够对移植干细胞进行10天的示踪,报告干细胞在体内的分布和迁移行为。然而,该示踪剂及其标记策略对MSCs的绝对标记量在CT成像中无明显优势,使其进一步应用受限。第二部分工作采用pH响应性聚合物聚（甲基酰基磺胺二甲氧嘧啶）（PSD）和细胞穿透肽（CPP）对金纳米粒子进行依次修饰构建了 pH响应性金纳米粒子干细胞示踪剂CPP-PSD@Au,用于解决干细胞CT成像示踪过程中标记效率低和细胞外排速率明显等问题。实验结果表明,由于CPP的表面修饰,CPP-PSD@Au能够对MSCs进行高效率的标记,单个细胞内Au含量最高可达480 pg,超过当前文献报道的绝大多数金纳米示踪剂。此外,在细胞转运过程中纳米粒子经历溶酶体或者内涵体等酸性环境时会发生pH响应行为,表现为净电荷减小和形成纳米粒子聚集体。该响应过程能显着延缓MSCs对CPP-PSD@Au的外排速率,因而可以实现对干细胞长时间的标记效果。另外,CPP-PSD@Au表现出良好的生物相容性,标记后对MSCs的活力、增殖、凋亡和分化等不造成明显的影响。在体内实验中,通过CT成像能够对IPF模型中的移植MSCs进行35天的示踪,监控干细胞在肺部的分布和迁移等过程。采用病理切片、免疫组化染色、活性生物因子检测等手段发现MSCs移植能够显着延缓IPF的进展,进一步研究发现参与炎症反应可能是MSCs发挥IPF的治疗作用的机制。综上,CPP-PSD@Au是一种有效的干细胞示踪剂,在对IPF治疗中移植MSCs的CT成像示踪领域具有良好的应用前景。
张天钰[7]（2021）在《脂肪干细胞新型冷冻保护剂的研究》文中提出目的:脂肪干细胞不仅具有促进组织修复与再生的作用,而且具有多向分化潜能,在临床应用中的作用十分广泛。因临床应用的需要,脂肪干细胞常需进行冷冻保存,冷冻保护剂在其中有关键作用。绝大多数的冷冻保护剂（CPA）含有有毒浓度的二甲基亚砜（DMSO）,限制了其临床应用。因此,本研究旨在探索一种安全无毒、易洗脱,可适合临床使用的新型CPA,实现脂肪干细胞高效率冻存。方法:通过不同浓度的海藻糖（Tre）（0.3 M,0.6 M,1.0 M,1.25 M）和不同浓度的甘油（Gly）（10%,20%,30%）分别冻存ADSCs。冻存30天后进行ADSCs复苏,通过复苏ADSCs的细胞活性以筛选海藻糖和甘油作为CPA的最优冻存浓度。我们进一步将海藻糖联合甘油应用于ADSCs冻存,与10%DMSO+90%胎牛血清（FBS）组进行比较,检测其冻存效率。主要通过细胞学实验,如CCK8实验、划痕实验、流式细胞实验、三向分化实验,检测实验组复苏ADSCs的细胞增殖迁移能力、多向分化潜力及表面标志表达。将实验组的复苏ADSCs与新鲜ADSCs移植小鼠创面,通过创面愈合的大体观察及组织学分析结果,验证实验组ADSCs的生物学功能。结果:在不同浓度海藻糖和甘油中,1.0 M的海藻糖及20%的甘油组复苏ADSCs的活性最高。应用海藻糖联合甘油（1.0 M Tre+20%Gly）作为CPA冻存ADSCs,冻存效率比单一成分更优,且与10%DMSO+90%FBS组无显着性差异。与10%DMSO+90%FBS组相比,1.0 M Tre+20%Gly组在细胞增殖能力、细胞表面标志物表达及多向分化潜能上均无显着性差异,但其迁移能力更佳（p<0.001）。复苏ADSCs移植创面实验结果表明1.0 M Tre+20%Gly组ADSCs具有与新鲜ADSCs同样的促进创面愈合（p=0.325）、促血管生成能力（p=0.528）。结论:1.0 M Tre+20%Gly作为新型冷冻保护剂,冻存ADSCs具有较好的冻存效率,其不影响复苏后ADSCs的细胞学及生物学功能,且成份均在临床上得以广泛使用,因此此新型CPA适合临床使用。
施锦涛[8]（2021）在《光固化GelMA水凝胶负载GDF5体外诱导大鼠BMSCs向类髓核细胞分化研究》文中研究指明背景:髓核变性是椎间盘退变（Intervertebral disc degeneration,IDD）的重要原因之一,针对IDD,传统上主要采用对症治疗方式,但并未使退变椎间盘恢复正常生物解剖结构,以生物材料、生物因子、干细胞相结合的新治疗手段有望运用于椎间盘再生策略。目的:通过制备光固化甲基丙烯酰化明胶（Methacryloyl gelatin,GelMA）水凝胶,初步探讨光固化GelMA水凝胶负载生长分化因子5（Growth differentiation factor 5,GDF5）在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）向类髓核细胞分化能力。方法:第一部分:分别配制5%、10%光固化GelMA水凝胶前体液,在波长为405nm,强度为25w/cm2的蓝光光源下照射10秒成胶,分别对其微观结构、溶胀性能、降解性能、力学性能进行表征。第二部分:通过CCK-8检测GDF5对BMSCs的增殖情况,检测BMSCs在5%、10%光固化GelMA水凝胶上的增殖;培养3、7天,通过钙黄绿素（Calcein-AM）/碘化丙啶（PI）活死染色检测BMSCs在5%、10%光固化GelMA水凝胶上黏附、细胞活力情况;利用酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked immuno Sorbent assay,ELISA）测试光固化GelMA水凝胶对GDF5的释放性能;在诱导的14、21天,通过实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,qPCR）检测聚集蛋白多糖（Aggrecan,ACAN）、Ⅱ型胶原α1蛋白（Collagen Type Ⅱ Alpha 1,COL2a1）、Y染色体性别决定区转录因子9（Sex-determing region of Y chromosome-box transcription factor 9,SOX-9）、角蛋白19（Keratin-19,KRT-19）四个髓核细胞标记基因的相对表达情况验证向类髓核细胞分化能力。结果:第一部分:（1）场发射扫描电镜（SEM）显示本实验制备的光固化GelMA水凝胶微观结构为疏松多孔状,5%光固化GelMA水凝胶的孔径大小为308.10μm±42.50μm,显着大于10%光固化GelMA水凝胶的孔径250.77μm±37.67μm（p<0.001）。（2）5%、10%光固化GelMA水凝胶分别在24h,32h各自达到溶胀平衡,其中5%光固化GelMA水凝胶累积溶胀率为1679.49%±37.38%,显着高于10%光固化GelMA水凝胶1218.28%±40.83%溶胀率（p<0.001）。（3）光固化GelMA水凝胶在磷酸缓冲盐溶液（Phosphate buffer saline,PBS）中降解缓慢,在1U/mL的胶原酶Ⅱ中降解迅速,表现出酶促降解性,其中在1×PBS溶液降解中,5%光固化GelMA水凝胶累积降解14.76%±0.19%,显着高于10%的光固化GelMA水凝胶10.31%±0.61%降解率（p<0.001）,在1U/mL的胶原酶Ⅱ中降解中,5%光固化GelMA水凝胶10h降解率为87.20%±2.92%,显着高于10%光固化GelMA水凝胶61.76%±4.57%降解率（p<0.001）。（4）力学性能结果显示10%光固化GelMA水凝胶的杨氏模量为192.47pa±11.37pa,显着高于5%GelMA光固化GelMA杨氏模量34.80pa±11.52pa（p<0.001）。第二部分:（1）GDF5在50-100ng/mL能保持BMSCs较高活力,能促进BMSCs生长,以100ng/mL最佳（p<0.001）,BMSCs在10%光固化GelMA水凝胶上生长状态显着优于5%光固化GelMA水凝胶（p<0.001）。（2）Calcein-AM/PI活死染色显示BMSCs在5%、10%光固化GelMA水凝胶上各培养3天、7天,BMSCs均表现出较好的黏附能力,并且细胞活力较高,均超过90%,差异无明显统计学意义（p>0.05）。（3）GDF5释放结果显示5%、10%光固化GelMA水凝胶在前5天都表现出了较高的GDF5释放性能,随着时间的增加,GDF5释放逐渐缓慢,5%光固化GelMA水凝胶累积释放率为24.51%±0.62%,显着高于10%光固化GelMA水凝胶14.14%±0.98%（p<0.001）。（4）qPCR结果显示在诱导14天,与10%Gel组相比,5%Gel组ACAN（p<0.01）、COL2a1、SOX-9、KRT-19基因表达量显着增高（p<0.05）;在诱导21天,与10%Gel组相比,5%Gel组ACAN、COL2a1、SOX-9基因表达水平显着增高（p<0.001）,KRT-19基因相对表达水平显着增高（p<0.01）。在诱导14、21天,与5%Gel组相比,5%Gel+G组ACAN、COL2a1、SOX-9、KRT-19基因相对表达水平均显着增高（p<0.001）。在诱导第14天,与10%Gel组相比,10%Gel+G组ACAN（p<0.001）、COL2a1（p<0.05）、SOX-9（p<0.01）、KRT-19（p<0.05）基因相对表达水平明显增高;在诱导21天,10%Gel+G组ACAN（p<0.001）、COL2a1（p<0.01）、SOX-9（p<0.01）、KRT-19（p<0.001）基因相对表达水平较10%Gel组显着增高。在诱导第14、21天,10%Gel+G组ACAN、COL2a1、SOX-9、KRT-19基因相对表达水平均显着低于5%Gel+G组（p<0.001）。结论:（1）光固化GelMA水凝胶具有相对可控的理化性能,其孔径、溶胀性能、降解性、机械性能可能受GelMA浓度调节,同时光固化GelMA具有酶促降解性。（2）GDF5能促进BMSCs增殖,光固化GelMA水凝胶不仅具有较好的BMSCs相容性、促进BMSCs的增殖与黏附作用,也具有一定GDF5缓释性能。（3）光固化GelMA水凝胶负载GDF5能使BMSCs向类髓核细胞分化,本实验以5%光固化GelMA水凝胶最佳。
袁宇,徐林[9]（2021）在《骨髓间充质干细胞联合3D生物打印技术治疗骨缺损的研究进展》文中提出骨缺损一直以来都是临床治疗中的难题,目前主要是行自体骨或人工骨移植治疗。但自体骨取骨的损伤和人工骨资源有限且价格昂贵使得骨移植手术在临床广泛应用受到限制。近年来国内外学者对骨髓间充质干细胞诱导分化成骨的研究愈加重视,对其分离提取和定向分化的研究取得了长足的进步。骨髓间充质干细胞可向成骨细胞、软骨细胞等分化且不存在排斥反应及伦理问题,其结合3D生物打印技术修复骨缺损具有精准化和可控性的优势,是一种极具潜力和应用前景的新型骨缺损修复技术。文章对骨髓间充质干细胞的生物学特性、成骨诱导及结合载体支架治疗骨缺损的研究进行阐述,为今后在骨缺损的临床治疗中提供理论依据。
吴乙时[10]（2020）在《人羊水间充质干细胞通过外泌体改善顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤》文中研究指明研究背景恶性肿瘤一直是威胁人类健康的重要原因之一。随着检测方法的日益改进,癌症早期诊断率逐渐增加。同时,随着治疗手段的提升和药品研发的飞速发展,女性恶性肿瘤患者的生存期逐渐延长,使得化疗对卵巢功能所造成的影响日益显现出来。卵泡储备对化疗十分敏感,化疗后短期可造成卵巢功能受损,长期可致生育率降低,早绝经风险明显增加,如潮热、失眠、骨钙流失等,这些严重影响了患者的生活质量,为此与卵巢功能保护相关的研究越来越多。现有的卵巢保护措施包括:卵巢组织冻存、胚胎或卵母细胞冻存、促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）以及干细胞治疗等。其中,干细胞治疗被认为是目前最有前景的治疗方法。干细胞能够不断进行自我更新,并且具有多向分化潜能。生理情况下能够替代衰老和凋亡的细胞,保证了机体组织结构的完整以及正常生理功能的发挥。病理情况下,能够抑制炎症反应,促进组织修复,有助于受损组织结构和功能的恢复。然而,干细胞治疗也存在一定潜在风险,例如,移植的细胞可能会引起血管栓塞、遗传物质发生突变、或造成机体肿瘤的发生,同时,干细胞的应用还存在伦理上的争议等。随着干细胞旁分泌物质外泌体的发现,人们逐渐将研究重心转向了干细胞分泌的外泌体。外泌体不仅具有来源干细胞的治疗效果,与干细胞相比外泌体更加安全稳定,并且具有良好的柔韧性和较高的细胞亲和力,不存在免疫排斥反应及伦理上的争议。越来越多的研究证实外泌体参与了许多生物学过程,包括调节免疫反应、维持体内平衡、凝血、炎症、血管生成和癌症进展。这些优势使得干细胞来源外泌体成为了一种非常有前景的无细胞治疗方法,在组织再生工程中被广泛关注。近年来,干细胞来源外泌体已经在神经系统、心脏疾病、肺损伤、骨缺损以及创伤等众多疾病中表现出了很好的组织损伤修复功能,但与卵巢功能保护的相关研究极少。为此,在本研究中首次选用人羊水间充质干细胞（human amniotic fluid stem cells,hAFSc）,将其分泌的外泌体（exosomes derived from hAFSc,hAFSc-EXO）作为研究对象,探讨hAFSc-EXO在化疗所致卵巢功能损伤中的作用。研究目的寻找合适的分离方法制备hAFSc-EXO;建立顺铂诱导的卵巢颗粒细（GCs）体外损伤模型;探讨hAFSc-EXO在顺铂所致卵巢功能损伤中的作用,为进一步研究干细胞分子作用机制奠定基础。研究方法:第1部分:hAFSc-EXO的分离与鉴定1.收集孕中期孕妇的羊水,通过细胞形态进行分选,分离培养,获得纯化的hAFSc;2.流式细胞术检测hAFSc表面干细胞标志物。采用Western blot检测P3、P8代hAFSc表面Oct4、Nanog和SOX-2表达情况,评估不同代数hAFSc的干性;3.分别应用常规超速离心方法、浓缩后超速离心方法以及SBI外泌体提取试剂盒三种方式提取hAFSc-EXO,透射电镜下观察;4.Western blot检测外泌体富集蛋白的表达情况。第2部分:大鼠GCs的原代培养和顺铂诱导的体外损伤模型的建立1.应用孕马血清促进小月龄大鼠排卵,提取原代GCs;2.结晶紫染色观察GCs形态;3.免疫荧光染色鉴定GCs表面FSHR的表达;4.结晶紫染色观察不同浓度顺铂对GCs的损伤程度;5.CCK8评估顺铂对GCs增殖的影响,建立稳定的体外细胞损伤模型。第3部分:hAFS-EXO对顺铂诱导的GCs损伤的保护作用根据培养条件和作用试剂的不同,将实验对象分为3组:对照组、顺铂组和hAFSc-EXO组。对照组应用正常培养基培养细胞,加入无菌PBS。顺铂组应用含2.5mg/L顺铂的培养基培养细胞,加入无菌PBS。hAFSc-EXO组应用含2.5mg/L顺铂的培养基培养细胞,加入hAFSc-EXO与细胞共孵育。1.CCK8检测顺铂组和hAFSc-EXO组GCs增殖受抑制程度,从细胞增殖水平评估hAFSc-EXO对顺铂诱导的GCs损伤的影响;2.TUNEL法检测,从细胞凋亡角度评估hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs的影响;3.Western blot检测3组细胞FSHR、Bax和Bcl-2表达情况,进一步评价hAFSc-EXO在卵巢功能、细胞凋亡中所起到的作用。研究结果:第1部分:1.通过细胞形态进行分选,从人孕中期羊水中可以获得纯化的h AFSc,显微镜观察可见细胞呈细长的纺锤形,细胞排列紧密;2.流式细胞术结果表明分离得到的h AFSc具有较强的干性,能够表达干细胞标志物CD29、CD90、SSEA、Oct3/4,同时具有低免疫原性,仅表达主要相容性复合体（MHC）I类分子蛋白HLA-ABC,不表达MHC II类分子蛋白HLA-DR,且不表达造血干细胞分子标志物CD34和CD45;3.Western blot结果显示P3、P8代h AFSc表面干细胞标志物Oct4、Nanog和Sox-2表达无明显差异,说明随着h AFSc不断扩增和传代,h AFSc仍然具有很好的干性;4.应用超速离心法,可以从无血清外泌体培养基中分离获得h AFSc-EXO,于透射电镜下观察,h AFSc-EXO为直径30-100nm的圆盘状小囊泡,具有典型的外泌体形态;5.分离提取的外泌体能够表达外泌体富集蛋白CD9、TSG101和LAMP1,h AFSc也可以表达同种蛋白,说明我们从培养基中分离获得的外泌体来自于h AFSc。第2部分:1.显微镜下观察,从大鼠体内分离提取的GCs具有和以往研究相同的形态,细胞呈多角形或星形,可见伪足,结晶紫染色结果相同;2.免疫荧光染色细胞核被染成蓝色,细胞核以外能够表达FSHR的部位被染成红色,结果发现细胞被染成弥漫的红色,说明GCs内的FSHR呈高表达,细胞活力良好;3.正常完全培养基培养48h,结晶紫染色见GCs生长旺盛,细胞融合达100%。2.5mg/L顺铂作用细胞48h,孔内的细胞减少,部分细胞坏死脱落。5mg/L顺铂作用48h,GCs坏死脱落明显;4.应用CCK8检测2.5mg/L和5mg/L顺铂对GCs增殖的抑制情况,结果两组细胞增殖均受到抑制,后者对细胞增殖抑制更加明显。2.5mg/L顺铂组24h增殖抑制率为30.69%±1.53%,48h增殖抑制率为48.86%±1.93%,5mg/L顺铂组24h增殖抑制率为54.69%±1.62,48h增殖抑制率为70.80%±1.96%。第3部分:1.2.5mg/L顺铂作用GCs 48h,CCK8检测各组细胞增殖抑制率,h AFSc-EXO组细胞增殖受抑制情况明显减轻,h AFSc-EXO组细胞增殖抑制率为38.4%±2.9%,顺铂组细胞增殖抑制率为49.7±1.9%;2.h AFSc-EXO组和顺铂组用含2.5mg/L顺铂培养基培养细胞48h后进行TUNEL检测,顺铂组中可见大量的凋亡细胞,而h AFSc-EXO组中凋亡的细胞很少;3.Western blot结果显示,与对照组相比,顺铂组和h AFSc-EXO组GCs的FSHR表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高,说明顺铂造成两组细胞功能受损,细胞凋亡增加。与顺铂组相比,h AFSc-EXO组GCs的FSHR、Bcl-2表达水平更高,Bax表达水平更低,说明h AFSc-EXO减轻了顺铂对GCs的损伤,抑制了细胞凋亡。研究结论1.通过细胞形态学分选,获得的h AFSc干性强,免疫原性低,且不具有造血干细胞成分;2.应用常规超速离心方法获得的h AFSc-EXO含量较多,杂质较少;3.用2.5mg/L顺铂可以建立稳定的GCs损伤体外模型;4.h AFSc-EXO能够减少顺铂诱导的大鼠GCs凋亡,降低顺铂对GCs增殖的抑制作用,改善卵巢功能。
二、干细胞研究的进展与应用前景（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞研究的进展与应用前景（论文提纲范文）
（1）干细胞基础研究和临床研究的现状分析（论文提纲范文）
| 1 资料和方法 |
| 1.1 干细胞基础研究数据来源与研究方法 |
| 1.2 干细胞临床研究数据来源与研究方法 |
| 2 结 果 |
| 2.1 干细胞基础研究现状 |
| 2.1.1 研究概况分析 |
| 2.1.2 研究热点分析 |
| 2.2 干细胞临床研究现状 |
| 2.2.1 临床试验现状分析 |
| 2.2.2 我国临床研究项目分析 |
| 2.2.3 干细胞产品商业化进展情况分析 |
| 3 讨 论 |
（2）GLI1调控肿瘤干细胞特性在化疗后卵巢癌复发和转移中作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 卵巢癌诊疗研究进展 |
| 2.1.1 卵巢癌概述 |
| 2.1.2 卵巢癌临床治疗现状 |
| 2.2 化疗对肿瘤微环境的作用研究进展 |
| 2.2.1 肿瘤微环境概述 |
| 2.2.2 肿瘤炎性微环境与肿瘤的进展 |
| 2.2.3 化疗诱导的肿瘤炎性微环境改变与肿瘤进展 |
| 2.2.4 以肿瘤微环境为靶点的化疗联合治疗策略 |
| 2.3 化疗对CSC特性的作用研究进展 |
| 2.3.1 CSC特性概述 |
| 2.3.2 CSC特性与肿瘤的进展 |
| 2.3.3 化疗与CSC的可塑性 |
| 2.3.4 肿瘤微环境相关因子对CSC特性的作用 |
| 2.4 黄连素的抗炎作用在重塑化疗后肿瘤微环境中的应用前景 |
| 第3章 化疗对卵巢癌CSC特性及其迁移与再增殖的作用研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 药品与试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 溶液配制 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 化疗对卵巢癌细胞迁移及再增殖能力的作用 |
| 3.2.2 化疗对卵巢癌细胞干细胞特性的作用 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 化疗后调控卵巢癌CSC特性关键转录因子GLI1的挖掘 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 药品与试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 溶液配制 |
| 4.1.4 实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 化疗后调控卵巢癌干细胞特性相关转录因子GLI1的筛选 |
| 4.2.2 明确GLI1在卵巢癌细胞化疗后迁移、再增殖能力及CSC特性增加中的作用及机制 |
| 4.2.3 化疗后肿瘤微环境PGE2对GLI1/BMI1信号通路介导的卵巢癌细胞CSC特性、迁移与再增殖能力的作用 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5 章 黄连素抑制CSC特性逆转卵巢癌化疗后复发与转移作用研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 药品与试剂 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.1.3 溶液配制 |
| 5.1.4 实验方法 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 黄连素对化疗后肿瘤微环境诱导卵巢癌细胞迁移、再增殖能力增加的干预作用 |
| 5.2.2 黄连素对化疗后肿瘤微环境诱导卵巢癌细胞干细胞特性增加的干预作用 |
| 5.2.3 黄连素通过抑制AA代谢通路对化疗后肿瘤微环境PGE2的调控作用 |
| 5.2.4 黄连素对化疗后肿瘤微环境诱导卵巢癌GLI1/BMI1信号通路上调的干预作用 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）天然食材来源的抗氧化剂参与调控骨性关节炎氧化应激的相关研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| Abstract |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA骨软骨组织及软骨细胞表型的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.3 实验操作步骤 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 实验讨论 |
| 第三章 膝关节腔注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠骨性关节炎的治疗效果 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.3 实验操作步骤 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 实验讨论 |
| 第四章 大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞表型的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.3 实验操作步骤 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 实验讨论 |
| 第五章 大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞在关节腔内生存及其作为干细胞的混悬液对大鼠OA的治疗效果的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与方法 |
| 5.3 实验操作步骤 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 实验讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 氧化应激参与调控骨性关节炎的机制 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（4）产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 简写对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌简介 |
| 1.2 纳豆激酶的研究进展 |
| 1.2.1 纳豆激酶的酶学性质 |
| 1.2.2 纳豆激酶的功能及其应用前景 |
| 1.2.3 纳豆激酶与其它溶栓药物的比较及其溶栓优势 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌凝乳酶的研究进展 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌在发酵食品及益生菌制剂中的应用 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌对肠道菌群的调节作用和在医药保健领域的应用 |
| 1.5.1 肠道菌群及肠道菌群失调相关疾病 |
| 1.5.2 炎症性肠病的发病机制及治疗方法的研究进展 |
| 1.6 立题背景和研究意义 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第二章 产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌菌株的分离、筛选及鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 主要试剂与材料 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 培养基配方 |
| 2.3.2 纤维蛋白溶解酶纤溶活力测定方法 |
| 2.3.3 凝乳酶活力测定方法 |
| 2.3.4 产纳豆激酶和凝乳酶双酶菌株的筛选及鉴定 |
| 2.3.5 产双酶菌株菌株的鉴定 |
| 2.3.6 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长特征检测 |
| 2.3.7 B.subtilis JNFE0126 株菌发酵液凝乳酶和纤溶酶活性的动态检测 |
| 2.3.8 B.subtilis JNFE0126 菌株产双酶能力的遗传稳定性测定 |
| 2.3.9 B.subtilis JNFE0126 菌株保藏 |
| 2.3.10 酶抑制剂抑制试验分析纤溶酶和凝乳酶的类型 |
| 2.3.11 B.subtilis JNFE0126 菌株的两种酶基因的PCR扩增和测序 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 产双酶(纳豆激酶和凝乳酶)菌株的筛选 |
| 2.4.2 B.subtilis nk1 菌株的鉴定 |
| 2.4.3 B.subtilis JNFE0126 菌株的生长和产酶特性 |
| 2.4.4 蛋白酶抑制剂实验分析纤溶酶和凝乳酶类型 |
| 2.4.5 B.subtilisJNFE0126 的纳豆激酶和M4 金属蛋白酶基因PCR扩增和测序结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 枯草芽孢杆菌产发酵液中纳豆激酶和凝乳酶的分离纯化及酶学性质研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 主要试剂与材料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 培养基 |
| 3.3.2 B.subtilis JNFE0126 菌株的活化 |
| 3.3.3 纳豆激酶、凝乳酶粗酶液的制备 |
| 3.3.4 蛋白质浓度的测定—Bradford检测法 |
| 3.3.5 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.3.6 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.3.7 纳豆激酶的酶学性质研究 |
| 3.3.8 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 纳豆激酶的分离纯化 |
| 3.4.2 凝乳酶的分离纯化 |
| 3.4.3 纯化酶的SDS-PAGE电泳检测结果 |
| 3.4.4 纳豆激酶的酶学性质 |
| 3.4.5 凝乳酶的酶学性质研究 |
| 3.4.6 纯化凝乳酶的凝乳效果及其潜在应用价值 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌发酵乳的研制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 主要试剂与材料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 发酵乳制备方法 |
| 4.3.2 单因素实验和正交试验 |
| 4.3.3 发酵乳理化指标测定 |
| 4.3.4 发酵乳感官评定 |
| 4.3.5 发酵乳储藏过程中的品质变化观察 |
| 4.3.6 发酵乳的微观结构观察 |
| 4.3.7 发酵乳动物体内抗血栓作用 |
| 4.3.8 试验数据统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 单因素试验优化发酵乳配方和发酵条件 |
| 4.4.2 采用正交试验确定发酵乳最适发酵条件 |
| 4.4.3 正交试验确定稳定剂配方 |
| 4.4.4 发酵过程中菌量、p H和酶活的变化 |
| 4.4.5 发酵乳总蛋白和总糖含量 |
| 4.4.6 发酵乳感官评定结果 |
| 4.4.7 发酵乳的流变学特性 |
| 4.4.8 发酵乳的持水力和质构测定结果 |
| 4.4.9 发酵乳的微观凝胶结构 |
| 4.4.10 发酵乳储藏过程中的品质变化: |
| 4.4.11 小鼠黑尾模型验证发酵乳体内抗血栓效果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌发酵乳预防和治疗炎症性肠病 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与设备 |
| 5.2.1 主要试剂与材料 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的制备及其CFU计数和革兰氏染色 |
| 5.3.2 DSS诱导性炎症性肠病动物模型的建立和动物分组 |
| 5.3.3 模型小鼠疾病活动指数(DAI)的测定 |
| 5.3.4 小肠和结肠的组织学切片观察和组织学评分 |
| 5.3.5 免疫组织化学染色 |
| 5.3.6 Western blotting检测蛋白表达水平 |
| 5.3.7 肠道菌群分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 枯草芽孢杆菌发酵乳的外观、CFU计数及其Gram’s染色 |
| 5.4.2 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对DSS诱导性炎症性肠病动物DAI的影响 |
| 5.4.3 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对小肠和结肠病理变化的影响 |
| 5.4.4 枯草芽孢杆菌发酵乳对白细胞浸润和炎症因子、抗炎因子表达的影响 |
| 5.4.5 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对Lgr-5,CDX-2,Mucin-2 表达水平的影响 |
| 5.4.6 口服枯草芽孢杆菌发酵乳对ZO1和Villin表达水平的影响 |
| 5.4.7 口服发酵乳对DSS诱导的IBD模型小鼠肠道菌群的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 纳豆激酶缓释颗粒的研制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料和设备 |
| 6.2.1 主要试剂与材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 缓释颗粒原材料的各种反应体系内纳豆激酶纤溶活性测定 |
| 6.3.2 双层壳-核结构的纳豆激酶缓释颗粒的设计和构建 |
| 6.3.3 纳豆激酶缓释颗粒的粒径和zeta电位测定 |
| 6.3.4 装载纳豆激酶和模型药物的缓释颗粒微观结构的显微镜观察 |
| 6.3.5 纳豆激酶缓释颗粒在储藏过程中的纤溶活性的动态测定 |
| 6.3.6 模拟消化液对缓释颗粒纤溶活性的影响 |
| 6.3.7 模拟消化液对缓释颗粒粒径、ζ-电位和表面结构的影响 |
| 6.3.8 荧光标记模拟药物(Ig G)缓释颗粒口服后在小鼠消化道内分布情况分析 |
| 6.3.9 口服纳豆激酶缓释颗粒后小鼠肠道内的活性酶的释放和吸收试验 |
| 6.3.10 口服纳豆激酶缓释颗粒对模型小鼠血栓治疗效果的评价 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 纳豆激酶缓释颗粒的设计与构建 |
| 6.4.2 颗粒双层壳-核结构的鉴定与验证 |
| 6.4.3 纳豆激酶缓释颗粒保藏过程中酶活的变化 |
| 6.4.4 缓释颗粒中纳豆激酶的体外释放特性 |
| 6.4.5 双层壳-核结构缓释颗粒所装载模型药物口服后在体内的释放 |
| 6.4.6 口服纳豆激酶缓释颗粒对黑尾模型小鼠的血栓治疗效果 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文的主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（5）胎盘间充质干细胞对糖尿病肾脏疾病免疫炎症损伤的修复作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 DKD的流行状况 |
| 1.2 DKD的发病机制 |
| 1.3 DKD的治疗现状 |
| 1.3.1 新型降糖药 |
| 1.3.2 RAAS系统抑制剂 |
| 1.3.3 内皮素受体拮抗剂 |
| 1.3.4 其他药物 |
| 1.4 间充质干细胞概述 |
| 1.4.1 MSCs的多向分化潜能 |
| 1.4.2 MSCs的旁分泌功能 |
| 1.5 MSCs在糖尿病及DKD治疗中的应用 |
| 1.5.1 MSCs在糖尿病治疗中的临床应用 |
| 1.5.2 MSCs在 DKD治疗中的应用 |
| 1.6 本研究目的与内容 |
| 第2章 糖尿病肾脏疾病免疫细胞的浸润模式分析 |
| 2.1 资料与方法 |
| 2.1.1 数据下载与预处理 |
| 2.1.2 应用CIBERSORT反卷积算法进行免疫浸润分析 |
| 2.1.3 主成分分析(principal component analysis,PCA) |
| 2.1.4 应用ss GSEA算法进行免疫浸润分析 |
| 2.1.5 免疫细胞浸润丰度的相关性分析 |
| 2.1.6 DKD标本获取 |
| 2.1.7 PAS与 Masson染色分析 |
| 2.1.8 多标记全景分析 |
| 2.1.9 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 纳入样本的基本临床特征 |
| 2.2.2 DKD与对照样本22 种免疫细胞浸润比例分析 |
| 2.2.3 DKD与对照样本22 种免疫细胞聚类分析 |
| 2.2.4 DKD与对照样本22 种免疫细胞PCA分析 |
| 2.2.5 免疫细胞在DKD和对照样本中的比例差异 |
| 2.2.6 DKD样本中24 种免疫细胞的相关性分析 |
| 2.2.7 DKD和对照组PAS与 Masson染色结果分析 |
| 2.2.8 DKD和对照组差异表达的免疫细胞验证分析 |
| 2.2.9 DKD和对照组PD-1 的表达水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 间充质干细胞对 DKD 模型大鼠免疫炎症损伤的修修复作用研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 主要试剂的配置 |
| 3.1.3 实验设备与仪器 |
| 3.1.4 P-MSCs的获取与分离 |
| 3.1.5 P-MSCs的鉴定 |
| 3.1.6 P-MSCs的培养技术 |
| 3.1.7 P-MSCs的体外标记 |
| 3.1.8 实验动物与分组 |
| 3.1.9 标本采集 |
| 3.1.10 生理生化指标的检测 |
| 3.1.11 肾脏病理指标的检测 |
| 3.1.12 流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞比例 |
| 3.1.13 利用Luminex技术检测细胞因子水平 |
| 3.1.14 肾脏组织m RNA转录组测序分析 |
| 3.1.15 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 P-MSCs细胞形态 |
| 3.2.2 P-MSCs细胞表面标志物 |
| 3.2.3 P-MSCs细胞多系分化潜能 |
| 3.2.4 P-MSCs标记和体内示踪 |
| 3.2.5 P-MSCs对 DKD模型大鼠理化指标的影响 |
| 3.2.6 P-MSCs对 DKD模型大鼠肾脏病理学改变的作用 |
| 3.2.7 P-MSCs对 DKD模型大鼠外周血Th17/Treg细胞平衡的作用 |
| 3.2.8 P-MSCs对 DKD模型大鼠系统及肾脏局部炎症因子的作用 |
| 3.2.9 P-MSCs对 DKD模型大鼠肾脏组织转录组分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 PD-1/PD-L1通路在P-MSCs调控 Th17/Treg 平衡中的作用研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验设备与仪器 |
| 4.1.3 P-MSCs的培养技术 |
| 4.1.4 分离大鼠脾脏淋巴细胞 |
| 4.1.5 q RT-PCR法测定si RNA PD-L1 干扰效率 |
| 4.1.6 P-MSCs与淋巴细胞共培养及分组情况 |
| 4.1.7 流式检测PD1 在淋巴细胞中的表达水平 |
| 4.1.8 流式检测Th17/Treg细胞比例 |
| 4.1.9 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 P-MSCs对 Th17 细胞的影响 |
| 4.2.2 P-MSCs对 Treg细胞的影响 |
| 4.2.3 P-MSCs对 PD1 表达水平的影响 |
| 4.2.4 si RNA序列的选择 |
| 4.2.5 下调P-MSCs上 PD-L1 表达对Th17 细胞的影响 |
| 4.2.6 下调P-MSCs上 PD-L1 表达对Treg细胞的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 全文总结 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 攻读博士期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）刺激响应性金纳米粒子对肺纤维化治疗过程中移植干细胞的CT成像示踪研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 特发性肺纤维化和干细胞治疗 |
| 1.1.1 IPF发病机理及病理过程 |
| 1.1.2 IPF的诊断和治疗 |
| 1.1.3 干细胞移植与IPF治疗 |
| 1.2 干细胞成像 |
| 1.2.1 磁共振成像 |
| 1.2.2 光学成像 |
| 1.2.3 光声成像 |
| 1.2.4 放射性核素成像 |
| 1.2.5 CT成像 |
| 1.3 金纳米粒子与干细胞CT成像示踪 |
| 1.3.1 金纳米粒子的结构和功能 |
| 1.3.2 示踪剂与干细胞标记 |
| 1.4 本论文的研究内容与意义 |
| 参考文献 |
| 第2章 温度响应性金纳米粒子用于IPF治疗过程中移植干细胞的CT成像示踪 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料与仪器设备 |
| 2.2.2 聚合物的合成和性能测定 |
| 2.2.3 温度响应性金纳米粒子的合成 |
| 2.2.4 纳米粒子的结构和性能表征 |
| 2.2.5 TRAuNPs对MSCs的标记 |
| 2.2.6 TRAuNPs的生物相容性 |
| 2.2.7 体外CT成像 |
| 2.2.8 IPF小鼠模型的建立 |
| 2.2.9 构建稳定表达荧光素酶的MSCs |
| 2.2.10 移植MSCs的CT成像示踪 |
| 2.2.11 生物发光成像 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 温敏性聚合物的结构和性能 |
| 2.3.2 纳米示踪剂的结构和温度响应性能 |
| 2.3.3 MSCs标记条件的筛选 |
| 2.3.4 标记温度对标记效率的影响 |
| 2.3.5 TRAuNP的生物相容性 |
| 2.3.6 表达荧光素酶报告基因MSCs~(Luc)的鉴定 |
| 2.3.7 肺纤维化小鼠模型的鉴定 |
| 2.3.8 干细胞CT成像 |
| 2.3.9 病理切片分析 |
| 2.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第3章 pH响应性金纳米粒子用于IPF治疗过程中移植干细胞的CT成像示踪 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂和仪器设备 |
| 3.2.2 化合物的合成与表征 |
| 3.2.3 纳米粒子的制备与性能测试 |
| 3.2.4 MSCs毒性和增殖 |
| 3.2.5 CPP-PSD@Au的标记条件 |
| 3.2.6 CPP-PSD@Au的摄取机制 |
| 3.2.7 示踪剂胞内分布及胞吐速率 |
| 3.2.8 MSCs凋亡和分化 |
| 3.2.9 体外CT成像 |
| 3.2.10 体内CT成像 |
| 3.2.11 IPF修复效果评价 |
| 3.3 结果和讨论 |
| 3.3.1 PSD的结构和性能 |
| 3.3.2 CPP-PSD@Au的合成与表征 |
| 3.3.3 CPP-PSD@Au的pH响应性质 |
| 3.3.4 CPP-PSD@Au对MSCs的标记 |
| 3.3.5 示踪剂在MSCs内分布和外排速率 |
| 3.3.6 CPP-PSD@Au的细胞摄取机制 |
| 3.3.7 CPP-PSD@Au的生物相容性 |
| 3.3.8 体外CT成像与检测限 |
| 3.3.9 MSCs体内CT成像示踪 |
| 3.3.10 IPF修复效果 |
| 3.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第4章 总结与展望 |
| 4.1 全文总结 |
| 4.2 展望 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（7）脂肪干细胞新型冷冻保护剂的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号表 |
| 第1 章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 国内外研究进展 |
| 1.2.1 无任何异种蛋白的冷冻保护剂 |
| 1.2.2 无 DMSO以及无 FBS冷冻保护剂 |
| 1.3 本研究目标 |
| 第2章 脂肪干细胞的获取及冻存 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 主要试剂配制 |
| 2.2.4 生物样本来源 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 脂肪干细胞的获取 |
| 2.3.2 细胞传代培养 |
| 2.3.3 细胞冻存 |
| 2.3.4 细胞复苏 |
| 2.3.5 台盼蓝染色检测细胞活性 |
| 2.3.6 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 台盼蓝检测复苏后ADSCs细胞数量及细胞活性结果显示1.0M海藻糖的冻存效率显着优于其余浓度 |
| 2.4.2 台盼蓝检测复苏后ADSCs细胞数量及细胞活性结果显示20%甘油的冻存效率显着优于其余浓度 |
| 2.4.3 台盼蓝检测复苏后ADSCs细胞数量及细胞活性结果显示1.0M海藻糖联合20%甘油的冻存效率显着优于单一成分 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 不同CPA冻存脂肪干细胞后细胞学检测 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.2.3 主要试剂配制 |
| 3.2.4 生物样本来源 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 脂肪干细胞的获取 |
| 3.3.2 细胞传代培养 |
| 3.3.3 细胞冻存及复苏 |
| 3.3.4 细胞形态观察 |
| 3.3.5 CCK8 检测细胞增殖能力 |
| 3.3.6 划痕实验检测细胞迁移能力 |
| 3.3.7 流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达情况 |
| 3.3.8 三向分化潜能检测 |
| 3.3.9 统计学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 通过显微镜观察不同冷冻保护剂冻存ADSCs后对其形态的影响显示1.0 MTre+20%Gly组形态与新鲜细胞保持一致 |
| 3.4.2 通过CCK8 检测不同冷冻保护剂冻存ADSCs后对其增殖能力的影响显示1.0 MTre+20%Gly组增殖能力最优 |
| 3.4.3 通过划痕实验检测不同冷冻保护剂冻存ADSCs后对其细胞迁移能力的影响显示1.0 M Tre+20%Gly组迁移能力最优 |
| 3.4.4 通过流式细胞术检测不同冷冻保护剂冻存ADSCs后对其表面标志的影响显示1.0 M Tre+20%Gly组增殖能力与新鲜细胞保持一致 |
| 3.4.5 不同冷冻保护剂冻存ADSCs后对其三向分化潜能的影响显示1.0 M Tre+20%Gly组分化潜能与新鲜细胞保持一致 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 不同冷冻保护剂冻存ADSCs细胞移植创面体内实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器设备 |
| 4.2.3 主要试剂配制 |
| 4.2.4 实验动物样本来源 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 脂肪干细胞的获取 |
| 4.3.2 细胞传代培养 |
| 4.3.3 细胞冻存及复苏 |
| 4.3.4 复苏细胞培养处理 |
| 4.3.5 构建小鼠创面 |
| 4.3.6 实验动物分组 |
| 4.3.7 术后创面大体形态观察和创面愈合率计算 |
| 4.3.8 组织切片 |
| 4.3.9 苏木精-伊红(H&E)染色 |
| 4.3.10 马松三(Masson’s Trichrome)染色 |
| 4.3.11 免疫组化染色 |
| 4.3.12 免疫组化分析 |
| 4.3.13 统计学分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 大体形态结果显示1.0 M Tre+20%Gly组保持很好的促进创面愈合能力 |
| 4.4.2 H&E和 Masson染色结果显示1.0 M Tre+20%Gly组与新鲜ADSCs组保持一致的病理学特征 |
| 4.4.3 免疫组化结果显示1.0 M Tre+20%Gly组保持很好的促血管生成能力 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 全文总结及前景展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（8）光固化GelMA水凝胶负载GDF5体外诱导大鼠BMSCs向类髓核细胞分化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 光固化GelMA水凝胶的制备及其表征 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验主要仪器 |
| 1.1.2 实验主要试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 光固化GelMA水凝胶的前体液配制 |
| 1.2.2 光固化GelMA水凝胶的微观表征 |
| 1.2.3 光固化GelMA水凝胶的溶胀率表征 |
| 1.2.4 光固化GelMA水凝胶在1×PBS中的降解 |
| 1.2.5 光固化GelMA水凝胶在胶原酶Ⅱ中的降解 |
| 1.2.6 光固化GelMA水凝胶的力学检测 |
| 1.3 统计学分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 光固化GelMA水凝合成 |
| 1.4.2 光固化GelMA水凝胶SEM微观表征 |
| 1.4.3 光固化GelMA水凝胶溶胀性能 |
| 1.4.4 光固化GelMA水凝胶的降解性能 |
| 1.4.5 光固化GelMA水凝胶的力学性能 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 第二部分 光固化GelMA水凝胶负载GDF5 体外诱导大鼠BMSCs向类髓核分化研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 大鼠BMSCs来源 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 实验主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 常用试剂的配制及保存 |
| 2.2.2 大鼠BMSCs的复苏及传代 |
| 2.2.3 GDF5对BMSCs的增殖实验 |
| 2.2.4 BMSCs在光固化GelMA水凝胶上的增殖实验 |
| 2.2.5 Calcein-AM/PI荧光检测活死细胞实验 |
| 2.2.6 光固化GelMA水凝胶复合GDF5 释放试验 |
| 2.2.7 BMSCs向类髓核分化实验 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 GDF5对BMSCs增殖情况 |
| 2.4.2 BMSCs在光固化GelMA水凝胶上的增殖情况 |
| 2.4.3 Calcein-AM/PI活死染色结果 |
| 2.4.4 GDF5 释放结果 |
| 2.4.5 髓核相关基因表达情况 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 展望 |
| 2.7 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 GelMA载干细胞移植在组织工程中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成果 |
| 致谢 |
（9）骨髓间充质干细胞联合3D生物打印技术治疗骨缺损的研究进展（论文提纲范文）
| 前言 |
| 1 BMSCs的分离培养及鉴定 |
| 1.1 BMCSs的分离培养 |
| 1.2 BMCSs的鉴定 |
| 1.2.1 ALP在BMCSs鉴定中的应用 |
| 1.2.1 骨涎蛋白在BMCSs鉴定中的应用 |
| 2 BMSCs分化的影响因素 |
| 2.1 骨形态发生蛋白-2(BMP-2）对BMSCs分化的影响 |
| 2.2 激素对BMSCs的成骨分化作用 |
| 2.3 细胞因子对BMSCs分化的影响 |
| 2.4 传统中药对BMSCs分化的影响 |
| 2.5 物理因素对BMSCs分化的影响 |
| 2.5.1 培养环境中氧浓度、超声波及电磁场对BMSCs分化的影响 |
| 2.5.2 培养环境中力学的变化对BMSCs分化的影响 |
| 2.6 BMSCs增殖分化中的双向免疫调节性 |
| 3 BMSCs的临床应用 |
| 3.1 BMSCs在骨疾病中的应用 |
| 3.2 BMSCs在其它疾病中的应用 |
| 3.2.1 BMSCs在组织器官修复中的应用 |
| 3.2.2 BMSCs在器官移植中的应用 |
| 4 BMSCs复合支架材料修复骨缺损 |
| 4.1 BMSCs复合支架材料在骨缺损的应用 |
| 4.2 BMSCs复合支架材料在软骨缺损的应用 |
| 5 生物3D打印技术 |
| 5.1 生物3D打印技术的优势 |
| 5.2 生物3D打印技术的打印程序 |
| 5.3 生物3D打印技术的原理 |
| 5.4 生物3D打印的载体及支架材料 |
| 5.4.1 生物3D打印的骨组织支架的必备条件 |
| 5.4.2 生物3D打印骨组织载体及支架材料的选择 |
| 6 常用的生物3D打印骨组织载体及支架材料 |
| 6.1 羟基磷灰石 |
| 6.2 磷酸三钙 |
| 6.3 海藻酸盐 |
| 6.4 丝素蛋白 |
| 6.5 壳聚糖 |
| 6.6 胶原材料 |
| 6.7 聚乙二醇 |
| 6.8 人工高分子与天然高分子复合材料 |
| 6.9 生物活性玻璃材料 |
| 6.1 0 抗菌材料 |
| 7 生物3D打印材料的活性基础 |
| 8 总结与展望 |
（10）人羊水间充质干细胞通过外泌体改善顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 外泌体的生物学起源 |
| 1.2 间充质干细胞来源外泌体在再生医学中的研究进展 |
| 1.2.1 MSC-EXO在神经系统中的研究进展 |
| 1.2.2 MSC-EXO在心脏疾病中的研究进展 |
| 1.2.3 MSC-EXO在肺损伤中的研究进展 |
| 1.2.4 MSC-EXO在肝脏损伤中的研究进展 |
| 1.2.5 MSC-EXO在骨缺损中的研究进展 |
| 1.2.6 MSC-EXO在软骨中的研究进展 |
| 1.2.7 MSC-EXO在肾脏疾病中的研究进展 |
| 1.2.8 MSC-EXO在肌肉损伤中的研究进展 |
| 1.2.9 MSC-EXO在创伤中的研究进展 |
| 1.2.10 MSC-EXO与生物材料结合在组织再生中的应用 |
| 第2章 hAFSc-EXO的分离与鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验标本 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.2 实验流程 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 hAFSc的分离和培养 |
| 2.3.2 hAFSc的传代和扩增 |
| 2.3.3 hAFSc的冻存和复苏 |
| 2.3.4 流式细胞术检测hAFSc表面蛋白 |
| 2.3.5 Western Blot检测hAFSc表面蛋白标志物 |
| 2.3.6 hAFSc-EXO的分离和定量 |
| 2.3.7 hAFSc-EXO的鉴定 |
| 2.3.8 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 hAFSc的形态学 |
| 2.4.2 hAFSc表面蛋白标志物的表达情况 |
| 2.4.3 不同代数hAFSc表面蛋白标志物表达情况 |
| 2.4.4 hAFSc-EXO提取方法的选择 |
| 2.4.5 hAFSc-EXO的鉴定 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 第3章 大鼠GCs的原代培养和顺铂诱导的体外损伤模型的建立 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 |
| 3.2 实验流程 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 大鼠GCs的提取和原代培养 |
| 3.3.2 大鼠GCs的鉴定 |
| 3.3.3 顺铂诱导的大鼠GCs损伤体外模型的建立 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 大鼠GCs的提取和原代培养 |
| 3.4.2 大鼠GCs的鉴定 |
| 3.4.3 顺铂诱导的大鼠GCs损伤体外模型的建立 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 第4章 hAFS-EXO对顺铂诱导的大鼠GCs损伤的保护作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 实验动物 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 |
| 4.2 实验流程 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 CCK8检测hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs增殖的影响 |
| 4.3.2 TUNEL法检测hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs凋亡的影响 |
| 4.3.3 Western Blot方法检测hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs的FSHR、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs增殖的影响 |
| 4.4.2 hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs凋亡的影响 |
| 4.4.3 hAFSc-EXO对顺铂诱导损伤的GCs功能的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 结论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
四、干细胞研究的进展与应用前景（论文参考文献）
- [1]干细胞基础研究和临床研究的现状分析[J]. 李梦诗,王越,徐莎,王灵,刘文庸. 第二军医大学学报, 2021(08)
- [2]GLI1调控肿瘤干细胞特性在化疗后卵巢癌复发和转移中作用及机制研究[D]. 赵雅蔚. 吉林大学, 2021(01)
- [3]天然食材来源的抗氧化剂参与调控骨性关节炎氧化应激的相关研究[D]. 杨君君. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [4]产纳豆激酶和凝乳酶枯草芽孢杆菌的筛选及其在发酵乳中的应用[D]. 张轩. 江南大学, 2021(01)
- [5]胎盘间充质干细胞对糖尿病肾脏疾病免疫炎症损伤的修复作用及机制研究[D]. 汪姣. 南昌大学, 2021(01)
- [6]刺激响应性金纳米粒子对肺纤维化治疗过程中移植干细胞的CT成像示踪研究[D]. 虞成功. 中国科学技术大学, 2021(09)
- [7]脂肪干细胞新型冷冻保护剂的研究[D]. 张天钰. 上海师范大学, 2021(07)
- [8]光固化GelMA水凝胶负载GDF5体外诱导大鼠BMSCs向类髓核细胞分化研究[D]. 施锦涛. 兰州大学, 2021(12)
- [9]骨髓间充质干细胞联合3D生物打印技术治疗骨缺损的研究进展[J]. 袁宇,徐林. 中国医学物理学杂志, 2021(01)
- [10]人羊水间充质干细胞通过外泌体改善顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤[D]. 吴乙时. 吉林大学, 2020(01)